Исследователи пошли принципиально иным путем. Вместо коррекции иммунной системы человека они решили устранить первопричину – выработку белка-раздражителя у самого животного. С помощью молекулярных «ножниц» CRISPR-Cas9 команда внесла точечную мутацию в последовательность ДНК гена Can f 1. Эта перестановка одного нуклеотидного блока нарушила инструкцию по сборке белка, фактически деактивировав его производство. Отредактированный генетический материал был интегрирован в донорские яйцеклетки биглей методом переноса ядра соматической клетки (SCNT).
На свет появились две самки – Альфи и Бейли. Полногеномное секвенирование подтвердило высокую точность вмешательства: непреднамеренных повреждений ДНК не выявлено. Последующий биохимический анализ образцов их шерсти, перхоти и слюны показал абсолютное отсутствие следов целевого протеина. Для сравнения пробы брали также у стандартного пуделя и голдендудла, которых часто считают гипоаллергенными; у этих животных концентрация Can f 1 оставалась высокой.
Кульминацией работы стала клиническая верификация. Экстракты биоматериала от обычных и трансгенных собак нанесли на кожу добровольца с подтвержденной аллергией. Реакция на контрольные образцы последовала незамедлительно – в первом случае появилось характерное покраснение и зуд. Однако контакт с тканями Альфи и Бейли не спровоцировал абсолютно никакого иммунного ответа.
Несмотря на успех, технология требует осторожности. Авторы подчеркивают необходимость долгосрочных наблюдений за здоровьем клонов и этическую экспертизу перед любым коммерческим применением методики.
